肉毒杆菌LAMP法恒温快速检测试剂盒

技术详细介绍

该成果来源于吉林省科技厅2015重点科技攻关项目“食品中肉毒杆菌LAMP检测试剂盒的开发与应用”。环介导等温扩增技术(Loop-Mediated Isothermal Amplification, LAMP)是一种新颖的核酸扩增方法。其基本原理是采用4/6条特异引物（针对基因的6/8个区域）及一种具有链置换活性的DNA聚合酶，在64℃左右对核酸进行等温扩增，短时间扩增效率可达到109～1010个拷贝。LAMP具有高特异性、高效性、快速、简便、易检测等特点，目前已应用于人类及动植物细菌、病毒、寄生虫、真菌等病原体的快速检测。

成果技术内容和对行业的意义：本研究根据肉毒杆菌特异基因序列筛选出特异引物，研制出食品中肉毒杆菌快速检测试剂盒，建立多种形态食品样品中肉毒杆菌的LAMP快速检测技术，开发出一种简便、快速、灵敏度和特异性高、适合现场对食品中肉毒杆菌进行快速检测的方法。利用“肉毒杆菌LAMP法恒温快速检测试剂盒”进行食品中肉毒杆菌检测，与传统实验室操作相比，可以直接获得检测结果，具有简单、快速、方便，适于现场操作等特点，对基本分析操作技能要求降低，更易标准化管理，有效排除了实验人员主观因素的影响，降低实验过程中的偶然误差。试剂盒兼具了快速、精准化、便捷化、可视化及低成本化等五大优势，具有广阔的应用前景，适合在有实际检测需求的基层、食品检验检疫单位、科研院所、海关出入境检疫局等多个领域进行推广应用。

成果技术指标及先进性：技术指标：吉林工商学院科研团队利用LAMP技术研发的“肉毒杆菌LAMP法恒温快速检测试剂盒”，可用于食品中肉毒杆菌检测，特异性好，体系最佳反应温度为64℃，最佳反应时间为60 min，最低检测浓度为0.0001 pg/µL。先进性：简易，采用等温扩增反应，不需要先经过变性过程。快速，扩增反应可在 15-60min内（通常30min）完成高特异性 针对六个特定的区域设计四个不同的引物，LAMP®法能准确的对目标基因进行扩增反应；检测可借由判定有无扩增产物来决定。高成本效益，只需要一种链置换反应聚合酶；不需要特殊的仪器；可肉眼目测反应结果。RNA扩增，只需加入反向转录酶。